Phospho-Spezifische Antikörper

Phosphorylierungen können eine große Rolle in der Regulation von Proteinaktivitäten oder ihrer Stabilität spielen. Phospho Antikörper können den Status der Phosphorylierungsstelle erkennen. Unser phosphospezifischer Antikörper Service enthält alle Schritte zur Erstellung Ihrer Antikörper: Nach der Synthese und Konjugation der phospho- und nicht-phospho-Peptide (1) werden die Tiere mit dem konjugierten Phosphopeptid (2) immunisiert (3). Nach der Antikörperproduktion wird das Serum mit dem Phosphopeptid affinitätsgereinigt, um die spezifischen Antikörper zu erhalten (4). An dieser Stelle des Prozesses sind noch Antikörper in der Fraktion vorhanden, die die nicht-phosphorylierten Peptide erkennen. Um diese zu entfernen wird im Anschluss eine Depletion mit dem Nicht-Phospho-Peptid durchgeführt. Das Ergebnis sind phosphospezifische Antikörper (5). Preise und Immunisierungsoptionen für das phosphospezifische Antikörperpaket von Kaninchen finden Sie auf unserer Kaninchen Antikörper Seite .

Peptidsynthese

Unsere Wissenschaftler helfen Ihnen dabei Peptidsequenzen für Ihr Projekt zu ermitteln, die das Phospho-Epitop repräsentieren können. Unsere Analysen stützen sich dabei auf die Löslichkeit, die Antigenizität, den Epitopen und unserer Erfahrung. Schicken Sie uns hierzu Ihre Proteinsequenz als Aminosäure-One-Letter-Code mit der gekennzeichneten phosphorylierten Aminosäure. Wir schlagen Ihnen Peptide vor. Eine Bestellung kommt nur dann zustande, wenn Sie die vorgeschlangene Peptidsequenz bestätigen.

Nachdem Sie die Peptidsequenz bestätigt haben, beginnen wir mit der Synthese des phosphorylierten und des nicht-phosphorylierten Peptids. Das phosphorylierte Peptid wird an einen Träger (Carrier) gebunden, um die Antigenizität zu erhöhen, das Nicht-Phosphopeptid wird für die anschließende Reinigung verwendet. Sie erhalten von beiden Peptiden ein Aliquot für Ihre eigene Forschung.

Immunisierung

Das an einen Träger gebundene Phosphopeptid wird für die Immunisierungen verwendet. Unser Komplettpaket A061 beinhaltet die Immunisierung von 2 Kaninchen. Bei phosphospezifischen Antikörpern empfehlen wir 2 Kaninchen zu immunisieren, da durch die Affinitätsreinigung und die anschließende Depletion viele unspezifische Antikörper entfernt werden und damit die Gesamtanzahl der Antikörper reduziert wird.
Nach 3 Immunisierungen wird ein Testserum entnommen, um den Titer zu bestimmen. Sie haben die Möglichkeit ein Aliquot des Serums zu erhalten, um den Titer in Ihrem Labor selbst zu bestimmen. Bitte beachten Sie, dass das Testserum nach der dritten Immunisierung nicht gereinigt ist und aus diesem Grund noch keine oder nur eine kleine Phosphospezifität vorhanden ist. Nach 2 weiteren Immunisierungen innerhalb unseres 63-Tage Protokolls wird das Endserum entnommen. Weitere Immunisierungen sind in der Regel nicht notwendig, können aber beauftragt werden.

Affinitätsreinigung und Depletion

Durch die Affinitätsreinigung mit dem Phosphopeptid werden alle peptidspezifischen Antikörper gereinigt. In dieser peptidspezifischen Antikörperfraktion sind auch Antikörper enthalten, die sowohl das phosphorylierte als auch das nicht-phosphorylierte Peptid erkennen. Um die Antikörper zu entfernen, die auch das nichtphosphorylierte Peptid erkennen, wird eine Depletion mit dem nicht-phospho Peptid durchgeführt. Die endgültige Fraktion enthält dementsprechend phosphopeptid-spezifische Antikörper.

Antikörper gegen Aminosäure Modifikationen

Der gleiche Prozess zur Herstellung von phosphospezifischen Antikörpern kann auch für andere Aminosäuremodifikationen verwendet werden. Antikörper gegen Acetylierungen, Glykosylierungen und weitere Modifizierungen sind möglich.

Bestellprozess

Davids gestaltet den Kauf und die Bestellungen von Antikörpern so einfach wie möglich. Senden Sie Ihre Peptid- oder Proteinsequenz an: info@davids-bio.com. All Ihre Daten werden vertraulich behandelt. Wenn Sie das Peptid selbst zur Verfügung stellen möchten, können Sie es an folgende Adresse senden:

Davids Biotechnologie GmbH
Röntgenstraße 3
93055 Regensburg
Deutschland

Die Immunisierungen beginnen in der Regel am gleichen Tag, wenn das Antigen in unserem Labor eintrifft. Bitte legen Sie dem Antigen folgende Informationen bei, damit wir das Antigen Ihrem Auftrag zuordnen können und damit den Prozess beschleunigen:

1. Ihr Antigen bzw. Ihre Peptidsequenz. Markieren Sie bitte die phosphorylierte Aminosäure
2. Konzentration & Pufferzusammensetzung Ihres Antigens
3. Unser Angebot, unser Bestellformular oder Ihre offizielle Auftragsnummer (PO)
4. VAT Nummer (nur für Kunden aus der EU, mit Ausnahme von deutschen Kunden)

Unser Bestellformular erhalten Sie hier.