Monoklonale Antikörper Herstellung

Entwicklung von Hybridoma

Die Entwicklung von monoklonalen Antikörpern wird mit Mäusen oder Ratten und einem beliebigen Antigen durchgeführt. Um die besten Ergebnisse zu erzielen werden die Immunisierungen mit unterschiedlichen Antigenkonzentrationen durchgeführt. Dies führt zu einem breiten Spektrum und einer optimalen Immunantwort. Die Fusion wird im Anschluss mit der Milz von dem Tier durchgeführt, das den besten Titer entwickelt hat.

Schrittweise Antikörperentwicklung

Sie haben die Möglichkeit das Projekt mit jedem Schritt zu beginnen oder zu beenden. So können beispielsweise Milzzellen bereitgestellt werden, damit Sie in Ihrem Labor die Fusion und das Screening durchführen können. Sie sind dementsprechend vollständig flexibel, was die Entwicklung angeht.

Individualisierung der Antikörper Entwicklung

Die Entwicklung von monoklonalen Antikörpern ist für jeden Kunden stark angepasst. Wir können unsere Protokolle Ihren wünschen Anpassen oder unsere gut etablierten Protokolle verwenden. Dies beinhaltet Immunisierungsprotokolle, Screening-Bedingungen oder alternative Screening-Substrate.

Antigen-Anforderungen für monoklonale Antikörper

Davids hat erfolgreich Antigene jeder Art für die Entwicklung von monoklonalen Antikörper verwendet. Rekombinante Proteine und Peptide, die einzelne Epitop-Regionen eines Proteins repräsentieren eignen sich hervorragend für die monoklonale Antikörperentwicklung. Tabelle 1 zeigt unsere Antigen-Empfehlungen. Wenn Ihr Antigen nicht in den ausreichenden Mengen verfügbar ist, können Sie uns schreiben. Gerne screenen wir die Klone mit mehreren oder anderen Antigenen als die, die für die Immunisierung verwendet wurden (positives oder negatives Screening). Geben Sie zu Beginn des Projektes an, wenn Sie mehrere Antigene für das Screening verwenden möchten. Wenn Ihr Antigen schwer zu produzieren oder kostenintensiv ist, fragen Sie nach einer effizienten Immunisierungsstrategie, um die benötigte Antigenmenge auf ein Minimum zu reduzieren.

	Antigen	Menge	Bemerkung	Versand
	Protein	2 - 3 mg 0,3 - 2 mg/ml	Wir verwenden Ihr Protein für die Immunisierungen und das Screening	-20°C (Eis-Packs) bis -80°C (Trockeneis) oder Lyophilisiert
	Protein Expression	-	Wir produzieren Ihr Antigen	Schicken Sie uns Ihre Proteinsequenz
	Peptide	3 - 5 mg 0,3 - 2 mg/ml	Wir können die Synthese und/oder Konjugation Ihrer Peptide übernehmen	Lyophilisiert oder mit Eis-Packs
	Zellen	106 - 107 cfu / Immunisierung	Verwenden Sie unser Zell Immunisierungs Kit für eine optimale Präsentation der Antigene	Bitte kontaktieren Sie uns, wenn Sie Zellen versenden
	Kleine Moleküle	1 - 10 mg 0,3 - 2 mg/ml	Wir bereiten Ihre Moleküle für die Immunisierung vor	Bitte kontaktieren Sie uns, wenn Sie kleine Moleküle versenden

STEP 1: Immunisierung

2 - 4 Monate

Für die Entwicklung der monoklonalen Antikörper werden BALB/c Mäuse bzw. WiStar Ratten mit unterschiedlichen Antigenkonzentrationen immunisiert. Durch die Variation der Antigenkonzentration erhält man ein breites Spektrum der Immunantwort. Mit einer ELISA Titerbestimmung wird das Tier identifiziert, das für die Fusion am besten geeignet ist. Sie erhalten die Titerergebnisse und auf Wunsch ein Aliquot des Testserums für Ihre eigenen Experimente. Mit Ihrer Rücksprache beginnen wir die Fusion und das Screening.

STEP	Tag	Beschreibung
STEP1: Immunisierungen
Preimmunserum	Tag 0
1. Immunisierung	Tag 1
2. Immunisierung	Tag 14
3. Immunisierung	Tag 28
Test Serum & ELISA Titerbestimmung	Tag 35
4. Immunisierung	Tag 42
5. Immunisierung	Tag 56
Test Serum & ELISA Titerbestimmung	Tag 63	Vorbereitung für die Fusion, wenn der Titer gut ist
6. Immunisierung	Tag 70	Optional
7. Immunisierung	Tag 84	Optional
8. Immunisierung	Tag 98	Optional
Test Serum & ELISA Titerbestimmung	Tag 112

STEP 2: Milzzellisolation & STEP 3: Fusion

1 Tag

Das Tier mit der besten Immunantwort erhält eine finale Immunisierung, um die antikörperproduzierenden Zellen zu boosten. Die Milzzellen werden direkt vor der Fusion isoliert und mit unsterblichen Myelomazelllinien fusioniert. Ein Teil der Milzzellen wird als Backup kryokonserviert. Die noch immunisierten Tiere werden weiter gehalten, bis die Fusion beendet wurde.
Alternativ isolieren wir RNA aus Ihren Milzzellen oder verschicken die Zellen an Ihr Labor für Ihre eigenen Experimente.

STEP 4: Screening

2 - 4 Monate

Davids kultiviert alle Fusionszellen und screent nach positiven Klonen, die Ihr antigenspezifische Antikörper produzieren. Das Screening erfolgt in Zellkulturplatten (alternative Screeningmethoden sind verfügbar). Positive Klone werden in Zellkulturflaschen überführt und nach Stabilität und Aktivität überprüft. Gerne verwenden wir mehrere positive oder negative Antigene für das Screening. Die besten Klone werden isoliert und kryokonserviert. Sie erhalten Überstand und ein Aliquot von gereinigten Antikörpern der besten Klone (bis zu 10 Stück) für Ihre eigenen Anwendungen und um den besten Klon für die Subklonierung zu bestimmen. Zudem erhalten Sie unser Screening-Protokoll mit allen Rohdaten für Ihre eigenen Unterlagen. Nach dem Screening können sie die Klone erhalten und in Ihrem Labor subklonieren oder die Subklonierung bei uns durchführen lassen.

STEP 5: Subklonierung

1 - 2 Monate

Die Subklonierung erfolgt mittels der "Limited-Dilution Technik", um eine Langzeitstabilität des Klons zu gewährleisten. Nach dem Subklonieren erhalten Sie den besten Subklone gefroren oder in Zellkultur für Ihr eigenes Labor. Die Rechte an den Klonen gehen nach der Bezahlung an Sie über.
Wir lagern die Klone 6 Monate als Backup. Eine weitere Lagerung ist empfehlensert und ermöglicht Ihnen eine schnelle Produktion und Reinigung Ihrer Antikörper von Ihrem Klon in unserem Labor.

Produktion & Reinigung Ihrer Antikörper

1 - 2 Monate

Wir bieten Ihnen die Produktion und Reinigung Ihrer Antikörper von Ihren Klonen an. Wir haben etablierte Reinigungsmethoden, um IgG oder IgM Antikörper zu reinigen. Für weitere Informationen gehen Sie auf: Monoklonale Antikörperproduktion.

Zusätzliche Produkte

Wir bieten eine Vielzahl von zusätzlichen Dienstleistungen für Ihre Experimente an. Für toxische Antigene empfehlen wir beispielsweise eine in vitro Immunisierung oder die Inklusion des Antigens in Liposomen. Die Isolierung der Zellen aus Milz, Knochenmark, Lymphknoten und PBMC's ermöglicht es Ihnen diese für RNA Isolationen oder andere Experimente zu verwenden.
Die ELISA Rohdaten sind in unserem monoklonalen Immunisierungsprogramm M001 enthalten.

Cat.No.	Beschreibung	Menge	Preis
A057	Zusätzliches Testserum	Abhängig vom Tier	Please ask
A705	Zusätzliche ELISA Rohdaten	Von 1 Serum	Please ask
N101	Milzzell Isolation	1 Milz	Preisliste
N201	PBMC Lymphozyten Isolation	1 Antiserum	Preisliste
N301	Knochenmarkzell Isolation	1 Tier	Preisliste
N401	Lymphknotenzell Isolation	1 Tier	Preisliste
M006	Subklassenbestimmung IgM/IgG	1 Klon	Preisliste
M008	Lagerung einer Zelllinie für ein Jahr	1 Klon, 3 Vials	Preisliste
M302	Mykoplasmen Test (PCR)	1 Zellkultur	Preisliste

Bestellprozess

Erhalten Sie Ihr individuelles Angebot für die Entwicklung von monoklonalen Antikörpern hier: info@davids-bio.com. Wir halten den Bestellprozess dabei so einfach wie möglich. Schicken Sie Ihr Antigen an folgende Adresse:

Davids Biotechnologie GmbH
Röntgenstraße 3
93055 Regensburg
Deutschland

Die Immunisierung startet in der Regel innerhalb von 5 Tagen, nachdem wir Ihr Antigen erhalten. Um den Immunisierungsstart zu beschleunigen und um Ihr Antigen mit dem richtigen Auftrag zu verbinden legen Sie bitte folgende Informationen bei:

1. Ihr Antigen
2. Konzentration & Pufferzusammensetzung Ihres Antigens
3. Unser Angebot, unser Bestellformular oder Ihre offizielle Auftragsnummer (PO)
4. VAT Nummer (nur für Kunden aus der EU, mit Ausnahme von deutschen Kunden)

Sie können Ihr individuelles Angebot mit unserem Antibody Creator erstellen. Unser Bestellformular finden sie hier. Wenn Sie Peptidantikörper bestellen möchten schicken Sie uns Ihre Proteinsequenz. Wir schlagen Ihnen Peptide vor, die Ihr Protein repräsentieren. Für weitere Informationen: Peptidantikörper